آنالیز اسید آمینه، آسیل کارنیتین و استروئیدها با دستگاه LC-MS/MS شیمادزو

آنالیز اسیدهای آمینه (AA) و آسیل کارنیتین ها (AC) در روش جمع آوری نمونه لکه خون خشک (DBS) با استفاده از آنالیز تزریقی (FIA) در حال حاضر به طور گسترده استفاده می شود. از سوی دیگر، به طور سنتی، آنالیز استروئیدی (Steroids Analysis) مانند 17-هیدروکسی پروژسترون با روش سنجش ایمنی(Immunoassays) انجام می شود، اما دستگاه LC/MS/MS یک جایگزین تحلیلی جذاب خواهد بود زیرا می تواند سایر استروئیدهای مرتبط را نیز غربال کند. استفاده از دستگاه LC/MS/MS منجر به کاهش مثبت کاذب و عملکرد کمّی دقیق تر می شود. در این مطالعه، ما یک استراتژی برای انجام هر دو آنالیز اسیدهای آمینه، آسیل کارنیتین ها و استروئیدها در یک دستگاه LC/MS/MS ارائه می‌کنیم.

روش ها و مواد قابل استفاده در آنالیز استروئیدها با دستگاه LC-MS/MS شیمادزو

آنالیت های مورد استفاده شامل 8 امینو اسید و 17 آسیل کارنیتین می باشد و از روش تزریق مستقیم در حلال (FIA) در این آزمایش استفاده شده است. به منظور اندازه گیری استرویئدها با دستگاه LCMS از 5 استروئید شامل کورتیزول، 21-دئوکسی کورتیزول (21-DOF)، 11-دئوکسی کورتیزول (11DOF)، آندروستندیون (4-AD) و 17-هیدروکسی پروژسترون (17-OHP) با روش کروماتوگرافی مایع (LC) به منظور جداسازی استروئیدها قبل از اندازه گیری آنها توسط MS/MS LC استفاده شد.

در شکل فوق در حالت اول با استفاده از شیر 6 پورت برای آنالیز اسید آمینه و آسیل کارنیتین نمونه بدون راه یابی به ستون و به صورت تزریق مستقیم در حلال راهی دتکتور MS شده است.

در شکل فوق در حالت دوم با ستفاده از شیر 6 پورت برای آنالیز استروئیدها نمونه از ستون کروماتوگرافی رد شده و لذا پس از بازشدن ترکیبات جهت شکست مولکولی رهسپار دتکتور جرمی گردیه است.

استانداردهای داخلی برچسب گذاری شده به صورت ایزوتوپی برای اسیدهای آمینه، آسیل کارنیتین ها و استروئیدها از آزمایشگاه ایزوتوپ کمبریج خریداری شد. مواد کنترل کیفیت از برنامه تضمین کیفیت غربالگری نوزادان در مراکز کنترل و پیشگیری از بیماری (CDC) به دست آمد.

شرایط آنالیز اسید آمینه، آسیل کارنیتین و استروئیدها با دستگاه LC-MS/MS شیمادزو

نمونه های DBS (d = 5mm) در صفحات 96 چاهی قرار گرفتند و اسید آمینه، آسیل کارنیتین و استروئیدها با 180 میکرولیتر محلول استونیتریل-آب 80% شامل غلظت های شناخته شده استانداردهای برچسب ایزوتوپ پایدار هر ترکیب استخراج شدند. استخراج در حمام اولتراسونیک به مدت 30 دقیقه انجام شد. نمونه ها با استفاده از یک سیستم Nexera UHPLC جفت شده به دستگاه LC/MS/MS مدل LCMS-8050 شیمادزو اندازه گیری شدند.

شرابط آنالیز اسید آمینه، آسیل کارنیتین و استروئیدها با دستگاه LCMS-8050 شیمادزو شیمادزو

HPLC
: 0.1% Formic acid – water	Mobile Phase A
: Methanol	Mobile Phase B
: 40 ºC	Column temperature [for Amino Acids and Acylcarnitines]
: GL Sciences Cartridge Guard Column E (10 mmL x 1.5 mm I.D.)	Guard Column
Time B conc. (%) Flow rate (mL min) 0 90 0.13 0.65 90 0.13 0.66 90 0.7 1.00 90 0.7	Gradient Program
: 1 µL	Injection Volume [for Steroids]
: Phenomenex Kinetex 2.6u XB-C18 (50 mmL x 2.1 mm I.D., 2.6µm)	Column
: 0.3 mL/min	Flow Rate
Time B conc. (%) 0 50 0.5 55 1.5 55 3.0 90 5.0 90	Gradient Program
: 10 µL	Injection Volume

نتیجه آنالیز اسید آمینه، آسیل کارنیتین و استروئیدها با دستگاه LC-MS/MS شیمادزو

DBS بعنوان یک روش آنالیز برای داروهای قلبی عروقی در لکه های خونی خشک شده در دستگاه LC-MS/MS، چندین مزیت را ارائه می دهد، به عنوان مثال، روش جمع آوری نمونه کمتر تهاجمی و بسیار ساده تر از روش رگ گیری است. علاوه بر این، ذخیره سازی و حمل و نقل ساده تری را برای شما فراهم می کند و همچنین می تواند خطر عفونت پاتوژن های مختلف را کاهش دهد و به حجم خون کمتری نیاز دارد. تا به امروز، دستگاه DBS-LC-MS/MS به عنوان یک روش مهم برای آنالیز کمّی مولکول های کوچک ظاهر شده است.

قبلاً یک روش نوآورانه غربالگری اسید آمینه ها، آسیل کارنیتین ها را توسعه دادیم که با استفاده از دستگاه LC/MS/MS مدل LCMS-8040 شیمادزو، تنها 1 میکرولیتر نمونه را تزریق کرد و زمان اجرای تحلیلی را با موفقیت به سرعت 74 ثانیه کاهش داد (روش معمولی > 120 ثانیه).

علاوه بر آن، ما به طور مستقل روشی را برای استروئیدها در DBS ایجاد کردیم. استروئیدها روی Phenomenex kinetex XB-C18 (50x2mm، 2.6μm) در دمای ستون 40 درجه سانتیگراد به مدت 5 دقیقه جدا شدند.

در این مطالعه، ما یک استراتژی برای انجام آنالیز اسید آمینه، آسیل کارنیتین ها و استروئیدها در یک دستگاه LC/MS/MS شیمادزو ژاپن ارائه می‌کنیم. اسید آمینه ها، آسیل کارنیتین ها و استروئیدها تنها از یک لکه خونی خشک شده استخراج شدند. این سیستم امکان آنالیز خودکار 7 دقیقه در تمام آنالیت های هدف را در 2 تزریق را فراهم می کند.

این پلتفرم ابزاری موثر برای غربالگری اولیه است و قادر است مصرف نمونه را تا 1 uL به حداقل برساند. با این حال، استفاده از سیستم LC/MS/MS شیمادزو با کارایی بالا به منظور دستیابی به سطح حساسیت مناسب برای استروئیدها به شدت توصیه می شود. با استفاده از دستگاه LC/MS/MS مدل LCMS-8050 شیمادزو، حد تشخیص مشاهده شده (LOD) برای آنالیز 17-هیدروکسی پروژسترون 0.19 نانوگرم در میلی لیتر بود.

شرکت ری نور آزما به ارائه انواع دستگاه ها و تجهیزات آزمایشگاهی مانند دستگاه های کروماتوگراف های مایع را با طیف وسیعی از برند های برتر جهان مانند شیمادزو می پردازد. کارشناسان مجرب شرکت ری نور آزما آماده پاسخگویی به سوالات شما عزیزان در زمینه خرید و ارائه خدمات فنی می باشند.