آنالیز داروها در پلاسما با دستگاه LCMS-8060 شیمادزو

اندازه گیری غلظت داروها در خون یا پلاسما نوعی آنالیز است که اغلب در چارچوب تحقیقات و نمونه برداری بالینی انجام می شود. بر این اساس، تکنیک هایی برای به دست آوردن نتایج سریع و آسان مورد نیاز است. در حال حاضر، دستگاه های LC/MS معمولاً برای اندازه‌گیری غلظت دارو در نمونه‌ها استفاده می‌شوند. با این حال، به دلیل ستون‌هایی که در دستگاه های LC/MS استفاده می‌شوند، اجزای ماتریکسی که از محصولات متابولیکی منشأ می‌گیرند، مانند پروتئین‌های خون و پلاسما، باید با دقت حذف شوند. اگر نمونه‌ها به این روش آماده سازی نشوند، می‌توانند باعث تخریب یا تغییر در وضعیت ستون‌ها شوند که می‌تواند بر نتایج تحلیلی تأثیر بگذارد. علاوه بر این، پیش تصفیه ناکافی نمونه ها می تواند منجر به آلودگی ابزار شود و تعداد دفعات نگهداری مورد نیاز را افزایش دهد.

این مقاله یک روش آنالیز را با استفاده از دستگاه LCMS-8045 شیمادزو مجهز به واحد یونیزاسیون الکترواسپری پروب (PESI) دستگاه LCMS-8060 شیمادزو به نام DPiMS-8060 معرفی می‌کند. سپس غلظت اورولیموس در پلاسمای تجاری تنها با آماده سازی ساده پروتئین زدایی اندازه گیری می شود.

اصول روش PESI دستگاه LCMS-8045 شیمادزو

هنگامی که یک دستگاه LC/MS برای آنالیز داروها در پلاسما استفاده می شود، فرآیند پروتئین زدایی باید با دقت بسیار انجام شود تا از تخریب خطوط جریان شامل انژکتور و ستون جلوگیری شود.

بنابراین، فرآیند از آماده سازی تا آنالیز تقریباً 30 دقیقه برای نمونه طول می کشد، اگرچه زمان می تواند بسته به فاز متحرک و روش تحلیلی مورد استفاده متفاوت می باشد. روش PESI مورد استفاده در اینجا یک تکنیک یونیزاسیون مستقیم است که شامل استفاده از ستون نیست. این امر هرگونه تأثیری بر نتایج تحلیلی به دلیل تخریب ستون را از بین می برد. علاوه بر این، تنها چند ده pL محلول در هر آنالیز مورد بررسی قرار می گیرد، بنابراین این روش آلودگی ابزار و تأثیر اثرات ماتریس را که می‌تواند با یونیزاسیون تداخل ایجاد کند به حداقل می‌رساند. با توجه به مزایای آن، روش PESI برای اندازه گیری های ساده مانند اندازه گیری غلظت دارو در نمونه ها ایده آل است.

مراحل فرآیند آماده سازی نمونه پلاسما برای آنالیز داروها در پلاسما با دستگاه LCMS-8060 شیمادزو که در شکل (2) مشاهده میکنید، به شرح زیر است:

• مرحله 1: 100 میکرولیتر اتانول با درجه LC/MS را به 100 میکرولیتر پلاسما اضافه کنید و به مدت 10 ثانیه در یک میکسر گردابی مخلوط کنید.
• مرحله 2: سانتریفیوژ در 10000 گرم به مدت پنج دقیقه برای حذف هر گونه پروتئین تنظیم شود.
• مرحله 3: مایع رویی را جمع آوری کنید.
• مرحله 4: 10 میکرولیتر از مایع رویی را به یک صفحه نمونه تخصصی اضافه کرده و آنالیز کنید.

*آنالیز در حدود 10 دقیقه در هر نمونه کامل می شود

اندازه گیری نمونه استاندارد داروی Everolimus

یکی مولکول های هدف داروی اورولیموس در این آزمایش استفاده شد (شکل (3)). اگرچه پلاسما حاوی تعداد زیادی از اجزای ماتریس است که با یونیزاسیون تداخل دارند، تایید شد که غلظت در پلاسما را می توان با استفاده از روش PESI در این شرایط اندازه‌گیری کرد.

نمونه های استاندارد اورولیموس محلول در محلول آب اتانول 50 درصد (v/v) در حالت Q3 Scan با تنظیمات پارامتر دستگاه در جداول 1 و 2 مورد آنالیز قرار گرفت(شکل 4 الف). سپس اسکن یونی محصول انجام شد. یون افزودنی (N m/z 980.8)، که دارای بالاترین شدت از سه نوع یون شناسایی شده توسط Q3 بود، به عنوان یون پیش ساز تنظیم شد. نتایج آنالیز نشان داد که یون های قطعه خاصی با تعیین مقدار CE 51.0- تولید می شوند (شکل (4) B). از این میان، یون قطعه با بالاترین شدت سیگنال (m/z 389.3) برای اندازه‌گیری everolimus در پلاسما استفاده شد.

اندازه گیری اورولیموس در پلاسما با دستگاه LCMS-8045 شیمادزو

نمونه ها بر اساس توالی شکل (2) آماده شدند. نمونه های پلاسما با غلظت های نهایی مختلف اورولیموس تهیه شد. سپس به مقدار مساوی اتانول اضافه شد و محلول ها در یک میکسر گردابی مخلوط شدند. محلول های مخلوط سانتریفیوژ شدند و سپس مایع رویی برای استفاده به عنوان نمونه های تحلیلی جمع آوری شد. از نظر شرایط تحلیلی، مقادیر پیکربندی شده در جداول [1] و [2] نشان داده شده است.

جدول [1] شرایط فعال سازی PESI

: -37 mm	Ionization Position
: 200 msec	Ionization Stop Time
: – 45.0 mm	Sampling Position
: 50 msec	Sampling Stop Time
: 250 mm/s	Probe Speed
: 0.63 G	Probe Acceleration

منحنی کالیبراسیون تهیه شده از نتایج تحلیل نمونه حالت MRM در شکل (5) نشان داده شده است.

A: منحنی کالیبراسیون برای غلظت Everolimus در پلاسما (n = 3).

B: مقدار % RSD مقدار محاسبه شده از میانگین مساحت و مقادیر انحراف استاندارد (SD) برای هر غلظت

منحنی کالیبراسیون برای اورولیموس در پلاسما خطی خوبی در محدوده غلظت 3 تا 50 نانوگرم در میلی لیتر بود، با ضریب تعیین R2 = 0.9972.

جدول [2] شرایط تحلیلی دستگاه طیف سنج جرمی LCMS-8060 شیمادزو

: 250 ℃	DL Temperature
: 50 ℃	Heat Block Temperature
: + 2.45 kV (ESI-positive mode)	Interface Voltage
: 50 msec	Sample Acquisition Stop time
: m/z 10 – 1200 (Q3 Scan) m/z 10 – 500 (Product ion scan)	Scan Range
: 5000 u/sec	Scan Speed

از نظر تغییرپذیری، مقدار %RSD تقریباً 20 % یا کمتر در محدوده خطی بود که برای آنالیز نیمه کمی (n = 3) بیش از اندازه کافی است. در این روش زمان آنالیز تقریباً 10 دقیقه به ازای هر نمونه شامل فرآیند آماده سازی بود. این نتایج نشان می‌دهد که اندازه‌گیری‌های دارو را می‌توان به سرعت و به راحتی از این طریق انجام داد.

نتیجه آنالیز داروها در پلاسما با دستگاه LCMS-8060 شیمادزو

این مقاله مثالی ارائه می دهد که دستگاه LCMS-8060 شیمادزو توانایی خوبی برای انجام اندازه گیری های وابسته به غلظت اورولیموس اضافه شده به پلاسما دارد. این واقعیت که مقدار %RSD حداکثر تقریباً 20% بود نشان می‌دهد که دستگاه حتی می‌تواند برای آنالیز کمی استفاده شود (شکل (5)). زمان مورد نیاز برای آنالیز، از جمله آماده سازی، حدود 10 دقیقه برای هر نمونه بود، که به این معنی است که زمان صرف شده برای اندازه گیری نمونه می تواند به طور قابل توجهی کوتاه شود. همچنین از آنجایی که این روش آنالیز شامل کروماتوگرافی مایع نمی شود، نتایج تحلیلی نمی تواند تحت تأثیر عواملی مانند آلودگی ستون یا خط جریان قرار گیرد.

این مقاله همچنین نشان می‌دهد که دستگاه LCMS-8060 شیمادزو را می‌توان با تکنیک‌های توصیف شده برای اندازه‌گیری مواد هدف در حلال‌هایی که حاوی انواع اجزای ماتریس هستند، استفاده کرد. بنابراین استفاده بعدی برای آنالیز نمونه های بالینی پیش بینی می شود.

شرکت ری نور آزما به ارائه انواع دستگاه ها و تجهیزات آزمایشگاهی مانند دستگاه های کروماتوگراف های مایع را با طیف وسیعی از برند های برتر جهان مانند شیمادزو می پردازد. کارشناسان مجرب شرکت ری نور آزما آماده پاسخگویی به سوالات شما عزیزان در زمینه خرید و ارائه خدمات فنی می باشند.