دستگاه HPLC از تجهیزات آنالیز دستگاهی در آزمایشگاه می باشد که با جداسازی اجزای موجود در یک نمونه مایع در ستون کروماتوگرافی، زمینه اندازه گیری دقیق آن ترکیبات را توسط دتکتور فراهم می آورد. با توجه به کاربردهای گسترده دستگاه HPLC، استفاده از آن در سال های اخیر بطور چشمگیری افزایش داشته است. یکی از بزرگترین کاربردهای دستگاه کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا، آنالیز آمینو اسیدها در نمونه های مختلف می باشد. استفاده از دستگاه HPLC برای آنالیز آمینو اسید ها بیشتر متوجه حوزه های صنایع غذائی، پزشکی و بیوتکنولوژی می باشد.
اندازه گیری آمینو اسید ها با دستگاه HPLC
آمینو اسید ها از ترکیبات تشکیل دهنده پروتئین هستند و پروتئین ها ترکیباتی هستند که نقش اساسی در فعالیت بدن ایفا می کنند. اسید آمینه ها در حالت کلی به دو دسته ضروری و غیر ضروری تقسیم بندی می شوند. آمینو اسید های ضروری آنهایی هستند که بدن قادر به تولیدشان نیست و باید از منابع غذائی برای بدن تامین شوند. یکی از روش های سنجش مقدار آمینو اسید ها در منبع غذائی و مکمل، استفاده از دستگاه دقیق و سریع HPLC در آزمایشگاه آنالیز دستگاهی می باشد. در تحقیقی اندازه گیری آمینو اسید های مختلف در منابع غذائی مختلف توسط دستگاه کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا تحت بررسی قرار گرفت.
به طور کلی از مهم ترین اسید آمینه ها که توسط دستگاه HPLC اندازه گیری می شوند به شرح زیر می باشند.
- آسپارتیک اسید
- گلوتامیک اسید
- پرولین
- آسپارژین
- سرین
- هیستیدین
- گلیسین
- ترئونئین
- آلانین
- تیروزین
- آرژنین
- والین
- متیونین
- ایزولوسین
- لوسین
- فنیل آلانین
- اورنیتین
- لیسین
برای آنالیز آمینو اسید های فوق معمولا از دتکتور فلورسانس بر روی دستگاه HPLC استفاده می شود.
کروماتوگرام آمینو اسیدهای ضروری که با HPLC تحت آنالیز قرار گرفتند.
منابع مختلف حاوی آمینو اسید ها
آمینو اسید های ذکر شده در منابع بسیاری وجود دارند، تعدادی از رایج ترین منابع آنها که معمولا در تحقیقات، تحت آنالیز با دستگاه کروماتوگراف مایع با عملکرد بالا قرار می گیرند به اختصار توضیح داده می شود.
- هیدرولیزات پپتید
آنالیز آمینو اسید ها در دو نوع از پپتید ها به نام های آنیوتانسین II (پپتید انسانی دارای هشت آمینو اسید مختلف)و نورونسن (پپتید موجود در مغز و روده پستانداران، شامل تعداد 13 نوع آمینو اسید مختلف) توسط دستگاه کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا انجام می گیرد.
- هیدرولیزات پروتئین
آنالیز آمینو اسید هایی مانند هیستیدین و تیروزین از سه نوع هیدرولیزات پروتئین شامل لیزوزیم (آنزیم موجود در سفیده تخم مرغ و اشک انسان که حاوی 130 نوع آمینو اسید مختلف است که تنها یک نوع هیستیدین و سه نوع از آن تیروزین می باشد) و کیموتریپسینوژن (آنزیم پنهان در روده کوچک که شامل دو نوع هیستیدین و چهار نوع تیروزین است) و پپسین (آنزیم موجود در شکم که تنها شامل یک نوع هیستیدین است) در آزمایشگاه و با دستگاه HPLC انجام می شود.
- نوشیدنی های الکلی
اندازه گیری آمینو اسید ها در این گروه از مواد با دستگاه HPLC، نیاز به مرحله استخراج ندارد و تنها با رقیق سازی میتوان نمونه را مستقیما در آزمایشگاه آنالیز کرد.
استفاده از دستگاه تمام اتوماسیون HPLC و دتکتور فلورسانس برای آنالیز آمینو اسید ها علاوه بر دقت، حساسیت و قدرت انتخاب پذیری بالا، امکان آنالیز مواد با حد تشخیص پایین را به راحتی فراهم می آورد. در صورتی که از دتکتور UV بر روی دستگاه کروماتوگرافی مایع استفاده شود، تشخیص با دقت 25 برابر کمتر انجام می پذیرد و تنها برای مواد با غلظت بیشتر از حد میکرو مولار و اسید آمینه هایی مانند سیستین و تریپتوفان که دارای خواص غیر فلورسانس هستند بیشتر استفاده می شود.
کاربردهای دیگر دستگاه HPLC
- آنالیز پاتولین در آب سیب با HPLC
- اندازه گیری الکل و شکر در نوشیدنی ها و مواد غدایی با اچ پی ال سی
- تعیین آمونیاک در آب با دستگاه HPLC
- آنالیز فرمالدهید آب با دستگاه کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا
- تشخیص مرفین با دستگاه HPLC
- آنالیز ترکیبات داروئی با دستگاه کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا
سلام ، ممنونم از مطالبتون
ببخشید میشه لیست کل آمینواسیدهایی که توسط دتکتور UV در دستگاه HPLC قابل شناسایی هستند رو معرفی کنید؟
با سلام و وقت بخیر خدمت شما
در پاسخ سوالی که پرسیده بودید باید بگم که داخل مقاله آنالیز آمینو اسید ها با دستگاه HPLC گفته شده است.