آب مورد استفاده برای HPLC

 

کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) یک تکنیک معتبر و قابل اعتماد است که به یک ابزار کاربردی در بسیاری از آزمایشگاه ها تبدیل شده است. دستگاه آنالیتیکال آزمایشگاهی High-Performance Liquid Chromatography همچنان با مشکلاتی مواجه است که می تواند موجب هدر رفتن زمان و منابع برای محقق شود. یکی از رایج ترین مشکلات در HPLC مربوط به کیفیت حلال/فاز متحرک است. آلاینده ها در حلال می توانند به روش های مختلف بر کار HPLC تأثیر بگذارد.

در آنالیز کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا آب برای استفاده در آماده سازی فاز های متحرک و نمونه ضروری است. اگر ناخالصی ها در فاز متحرک حضور داشته باشند، می توانند سیگنال های زمینه را افزایش دهند. به این ترتیب، نویز پایه و دریفت افزایش می یابد و یا سبب ایجاد سایر پدیده ها مانند پیک های منفی یا پیک های مجهول در طول شویش شیبی می شود. همچنین، اگر ناخالصی در محلول های نمونه حضور داشته باشند، می تواند باعث ایجاد پیک های مجهول شود.

چه سطحی از خلوص برای آنالیز HPLC ضروری است؟

استاندارد JIS K 0124: 2013 “قوانین عمومی برای کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا” مواردی را مشخص می کند. آب مورد استفاده برای این استاندارد باید توسط دستگاه آب خالص ساز با ترکیبی از روش های اسمز معکوس، تقطیر، مبادله یونی، اشعه ماوراء بنفش، فیلتراسیون یا دیگر روش ها خالص سازی شود و باید دارای یک سطح کیفی آب باشد که در تجزیه و تحلیل مداخله نکند. کیفیت آب باید بر مبنای مقادیر شاخص مانند مقاومت ویژه، مقدار کل مواد آلی (TOC) یا مقادیر جذب مورد ارزیابی قرار گیرد.

چه آبی باید در کروماتوگرافی فاز معکوس استفاده شود؟

از آنجایی که کروماتوگرافی فاز معکوس (Reversed Phase Chromatography) معمولاً به عنوان تکنیکی برای آنالیز یا جداسازی مواد آلی استفاده می شود، آب مورد استفاده برای تهیه فاز های متحرک یا نمونه ها باید به اندازه کافی عاری از هر ماده آلی باشد. با این وجود، سطح خلوص مورد نیاز به آشکارساز مورد استفاده بستگی دارد. در صورت استفاده از آشکارساز جذب ماوراء بنفش، به طور معمول توصیه می شود از آب مقطر تجاری HPLC استفاده شود. ناخالصی ها با جذب در ناحیه UV از آب مقطر تجاری HPLC حذف می شوند و میزان جذب در نواحی طول موج کوتاه تر تضمین می شود. بنابراین، آب HPLC به طور کلی می تواند بدون نگرانی استفاده شود.

اگر خودتان آب را تصفیه می کنید، به طور معمول تصفیه آب به روش تبادل یونی و تقطیر به تنهایی کافی نیستد. در عوض، یک سیستم تولید آب فوق خالص به شدت توصیه می شود. در سال های اخیر، روند استفاده از سیستم های تولید آب فوق خالص است که می تواند موجب کاهش مقدار کل کربن آلی (TOC) با استفاده از تابش اشعه ماوراء بنفش برای تجزیه مواد ارگانیک شود، افزایش یافته است. به طور خاص، در مورد شویش شیبی یا گرادیان، تفاوت در سطوح TOC می تواند به طور قابل توجهی بر روی ظهور پیک های ناشناخته تأثیر می گذارد. از سوی دیگر، اگر یک آشکارساز فلورسانس و اسپکترومتر جرمی مورد استفاده قرار گیرد، آب مقطر تجاری HPLC ممکن است ناکافی باشد. در چنین مواردی، از آب گرید آنالیز فلورسانس یا گرید LCMS، یا از یک سیستم تولید آب خالص استفاده می شود.

با توجه به JIS K 0211: 2013 “شرایط فنی شیمی آنالیتیکال (بخش عمومی)” آب فوق خالص را به صورت زیر تعریف می کند.

• آب خالص شده با مقدار بسیار کم TOC و مقاومت 18 MΩ·cm یا بیشتر (هدایت الکتریکی 0.056 μS/cm یا کمتر).
• تخلیص آب با استفاده از ترکیبی از روش ها مانند غشا های اسمز معکوس، پلیمر های تبادل یونی، کربن فعال، اشعه ماوراء بنفش و اولترافیلتراسیون به طوری که مقاومت 18 MΩ·cm یا بیشتر (هدایت الکتریکی 0.056 μS/cm یا کمتر) است.

  تخلیص آب با آب خالص ساز برای دستگاه HPLC

چه آبی باید در کروماتوگرافی یونی استفاده شود؟

با توجه به اینکه کروماتوگرافی یونی (Ion Chromatography) اساساً یک تکنیک آنالیتیکال برای اندازه گیری مواد یونی است، مهمترین نکته استفاده از آبی است که یون های آن به اندازه کافی حذف شده باشند. بهتر است از آب یک سیستم تولید آب فوق خالص با مقاومت ویژه 18 MΩ·cm یا بیشتر استفاده شود.

کیفیت آب مقطر تجاری HPLC برای استفاده در آنالیز هایی هایی که از آشکارساز جذب UV استفاده می کنند، تضمین شده است. اما همانطور که در بالا اشاره شد، لزوماً برای استفاده در تجزیه و تحلیل یون های غیر آلی تضمین نمی شود. بنابراین، قبل از استفاده از آب، باید تأیید شود که هیچ مشکلی برای آنالیز ایجاد نمی کند. به طور کلی، آب تجاری علامت دار به عنوان آب تبادل یونی یا آب خالص توصیه نمی شود، چرا که کیفیت می‌تواند بسته به تولید کننده متفاوت باشد. بر اساس نکات فوق، برای کروماتوگرافی یونی، با استفاده از آب تازه خالص شده از یک سیستم تولید آب فوق خالص، نتایجی عاری از دردسر و نگرانی فراهم خواهد شد.

راه مناسب برای مدیریت آب چیست؟

• هرچه خلوص آب بیشتر باشد، مراقبت مورد نیاز برای رسیدگی به آن بیشتر است.
• آب قادر به انحلال انواع مختلفی از مواد است، بنابراین، آلودگی بلافاصله از طریق تماس با هوا شروع می شود.
• در صورت استفاده از آب تجاری، باید آن را در اسرع وقت مصرف کرد.
• اینکه سیستم‌ های تولید آب فوق خالص به طور مرتب نگهداری شوند، اهمیت بسزایی دارد.
• همچنین، به حداقل رساندن تماس با هوا با عدم تولید حباب هنگام کسب آب تجاری یا آب خالص از سیستم تولید آب فوق خالص مهم است.
• باید سعی شود آب مستقیماً به ظرف آماده سازی اضافه شود و استفاده از بطری های شستشو به حداقل برسد.
• آب در بطری های شستشو می تواند به راحتی آلوده شود و ممکن است حاوی پلاستی سایزر های نفوذی از دیواره های داخلی بطری پلاستیکی باشد.