دستگاه های طیف سنج جرمی TOF به کمک دفع لیزر و یونیزاسیون زمان پرواز از ویژگی های ساده و سریع دستیابی به اطلاعات مربوط به وزن مولکولی از طیف گسترده ای از نمونه های ماکرومولکولی، از جمله پپتیدها، پروتئین ها و ماکرومولکول های مصنوعی بهره می برند. دستگاه های اسپکترومتر جرمی TOF با بهره گیری از یونیزاسیون نمونه و اندازه گیری و جداسازی یون ها از طریق نسبت جرم به بار و اندازه گیری زمان پرواز بکار می روند. از دستگاه MALDI-TOF MS به طور گسترده ای برای تعیین وزن مولکولی محصولات سنتز شده و مواد طبیعی در آزمایشگاه های تحقیق و توسعه و در زمینه کنترل کیفیت استفاده می شود.
شناسایی و آنالیز موی حیوانات
یکی از کاربردهای جدید دستگاه MALDI که مورد توجه و استفاده قرار گرفته است، روشی برای تمایز موی حیوانات با شناسایی گونه های خاص پپتید در موهای حیوانات است. این روش تمایز توسط سازمان بین المللی استاندارد (ISO) به عنوان “روشی برای تجزیه و تحلیل پروتئومی ترمه و برخی دیگر از الیاف موی حیوانات” تأیید می شود و توسط استاندارد ISO تعریف می شود.
در نظر گرفته می شود که این تمایز دارای پتانسیل نه تنها برای ساختن ترمه، بلکه همچنین برای آلودگی مواد غذایی و غیره، با گنجاندن مواد خارجی، امکان استفاده دارد، زیرا تجزیه و تحلیل حتی با یک تار مو نیز امکان پذیر است. در این مقاله نمونه ای از تجزیه و تحلیل کمی الیاف موی حیوانات با استفاده از دستگاه رومیزی اسپکترومتر جرمی TOF مدل MALDI-8020 شیمادزو معرفی می شود. الیاف بررسی شده در این مقاله ترمه و پشم می باشد که در ادامه در باره آنها توضیح داده شده است.
ترمه
یک نوع پارچه گرانبها می باشد که از الیاف بسیار لطیف ساخته می شود و دارای طرح های متنوعی می باشد. در بافت ترمه از الیاف پشم گوسفند مرغوب استفاده می شود. رنگ هایی که در ترمه بکار می روند همه طبیعی می باشند.
پشم
الیافی هست که برای ساخت پارچه و در نساجی استفاده می شود. پشم می تواند پشم گوسفند، شتر یا خرگوش باشد. پشم از پروتئین و مقدار کمی چربی تشکیل شده است.
روش آنالیز موی حیوانات با استفاده از دستگاه اسپکترومتری جرمی MALDI-8020 TOF
آماده سازی نمونه ها طبق روشی که توسط استاندارد ISO ارائه شده، انجام می شود. روش کلی به این صورت است که در این مرحله، موهای بکر و دست نخورده ترمه و پشم گوسفند را با قیچی برش داده و با آسیاب گلوله ای به یک پودر ریز تبدیل می کنند. در مرحله بعد ، 4٪ سدیم دودسیل سولفات (SDS) حاوی 50 میلی مولار دیتیوتریتول (DTT) و 0.5 میلی لیتر 0.1 میلی لیتر محلول بافر فسفات (pH 7.8) به 10 تا 50 میلی گرم مو خام خرد شده و محلول اضافه می شود. سپس در دمای 95 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه تا 1 ساعت گرم شد که پس از گرم شدن، یدواستامید به محلول عصاره اضافه شد تا نمونه در غلظت 100 میلی متر تنظیم شود.
سپس محلول به مدت 15 دقیقه در دمای اتاق واکنش داد و پس از آن واکنش با افزودن 10 میکرولیتر 25 میلی مولار DTT متوقف شد. عصاره با الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید SDS (SDS-PAGE) جدا و رنگ آمیزی شد و قطعات ژل حاوی پروتئین هدف بریده شد. پس از برطرف کردن لکه Coomassie Brilliant Blue (CBB) با استفاده از 50 میلی مولار بی کربنات آمونیوم و 50٪ استونیتریل ، نمونه با افزودن تقریبی 150 نانوگرم تریپسین در دمای 50 درجه سانتیگراد هضم شد. نمونه های هضم شده با استفاده از ZipTip® μC18 (Merck Millipore) نمک زدایی شدند. نمونه محلول نمک زدایی شده را به صورت یک قطره روی صفحه هدف MALDI قرار دادیم، سپس با 0.5 میکرولیتر از محلول ماتریس (ماتریس به صورت محلولی که در آن CHCA (α-سیانو-4-هیدروکسی سینامیک اسید) در استونیتریل 50% و 0.05% اسید تری فلوئوراستیک اسید (TFA) حل شد تا غلظت 5 میلی گرم در میلی لیتر بدست می آید.) روی نمونه پوشانده شد و طیف سنجی جرمی با استفاده از دستگاه MALDI-8020 انجام شد.
با استفاده از دستگاه طیف سنجی جرمی MALDI-8020 توالی های مختلف پپتید در ترمه و پشم گوسفند مشخص می شود که با استفاده از این روش می توان درباره موی انسان و موش هم به نتایج جالبی رسید. با مشاهده نتایج این گونه ها می توان نوع موی حیوان را شناسایی و نسبت اختلاط پروتئین ها و الیاف را اندازه گیری کرد. ممکن است ذکر شود که پروتئین اصلی تشکیل دهنده موی حیوانات کراتین است و پپتیدهای شناسایی شده در اینجا نیز از کراتین گرفته شده اند.
با توجه به کارایی فوق العاده دستگاه طیف سنجی جرمی MALDI-8020 TOF اگر قصد خرید آن را دارید متخصصان شرکت ری نور آزما آماده ارائه خدمات مشاوره رایگان برای خرید و خدمات پس از فروش می باشند.
